01. 貼壁VS懸浮轉(zhuǎn)染區(qū)別

02. 細(xì)胞培養(yǎng)與準(zhǔn)備

03. 轉(zhuǎn)染操作

3.1 細(xì)胞準(zhǔn)備

• 提前一天種板，準(zhǔn)備貼壁細(xì)胞。
• 在96孔板中加入約2.5×10^4細(xì)胞，細(xì)胞過(guò)夜貼壁。
• 待細(xì)胞匯合度為70%-80%時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，用Opti-MEM輕柔清洗細(xì)胞兩次，并加入20 μL Opti-MEM備用。

3.2 配置ProteanFect轉(zhuǎn)染體系

• 在40 μL Reagent A中加入0.5 μg EGFP mRNA，充分混勻。
• 往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混勻。

3.3 轉(zhuǎn)染

• 將上述ProteanFect轉(zhuǎn)染液加入細(xì)胞。
• 37℃培養(yǎng)箱孵育60分鐘。
• 棄轉(zhuǎn)染液（為避免細(xì)胞損失，無(wú)需完·全棄盡）。
• 加入200 μL完·全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，24小時(shí)后檢測(cè)EGFP mRNA表達(dá)，48小時(shí)后檢測(cè)GFP pDNA表達(dá)。

04. 轉(zhuǎn)染檢測(cè)