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| 高品質的游離DNA (cell free DNA) NGS文庫構建 | ||||||||||||||||||||||||||
| ThruPLEX® Plasma-Seq Ki | ||||||||||||||||||||||||||
| · 專為cfDNA設計：經(jīng)過優(yōu)化的修復及連接試劑 · 高品質NGS文庫：高的文庫多樣性，在寬廣的GC含量范圍內，可以達到高檢測再現(xiàn)性 · 起始量范圍廣：＜1 ng到30 ng cfDNA量 · 快速簡便：1個反應管、2小時、3步反應的簡單操作，無需純化或樣品轉移步驟 · 應用領域：液態(tài)活檢、ctDNA、目標區(qū)域測序等領域文庫構建 · 兼容自動化平臺：Beckman FXP Workstation | ||||||||||||||||||||||||||
| ■ 產(chǎn)品說明： | ||||||||||||||||||||||||||
ThruPLEX Plasma-seq Kit基于ThruPLEX技術，并用于血漿來源cfDNA高品質NGS文庫構建。該試劑已針對cfDNA進行了專門優(yōu)化，在保持樣本GC代表性的基礎上，盡可能的提升了文庫的復雜度。文庫可用于CNV分析、全基因組測序分析或是采用一些panel針對目標區(qū)域進行捕獲富集后的DNA分析,如Agilent SureSelect and Roche NimbleGen SeqCap EZ。
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| DNA HT dual index kits | ||||||||||||||||||||||||||
| DNA HT dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用，用以構建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含Illumina Nextera® XT v2 index序列對應的index引物，多可提供384種不同的雙端index，用于樣本混合測序時的區(qū)分。其中index引物預先分裝在4個不同條形碼標記的index微孔板中，每個微孔板可提供不同的96種index組合（Code No.R400660-R400663），index微孔板（96N Sets A-D）的每個孔提供的量足夠進行一次測序反應；另一種是一套中有24個單獨的反應管，每個反應管中包含不同的雙端index組合（Code No.R400664），且每個反應管（24N）提供的量足夠進行兩次測序反應。 | ||||||||||||||||||||||||||
| DNA unique dual index kits | ||||||||||||||||||||||||||
| DNA unique dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用，用以構建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含“IDT for Illumina UD”對應的index引物，多可提供96種不同雙端index，用于樣本混合測序時的區(qū)分。index引物預先分裝在不同的4組各24個單獨的管中，其中每組可提供24種不同index引物組合（Code No.R400665-R400668）。每個index引物管（24U Sets A-D）提供的量足夠進行兩次測序反應。 | ||||||||||||||||||||||||||
| DNA single index kits | ||||||||||||||||||||||||||
DNA single index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用，用以構建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含與“TruSeq LT set A”序列對應的index引物，可提供24種單端index，用于樣本混合測序時的區(qū)分。index引物預先分裝在不同的2組各12個單獨的管中，其中每組可提供12種不同index引物組合（Code No.R400695和R400697）。每個index引物管（12U Sets A-B）提供的量足夠進行8次測序反應。
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| 圖1. ThruPLEX® 技術概要。ThruPLEX Plasma-seq Kit技術3步反應即可完成針對cell free DNA的建庫工作。1~30 ng含量的cf DNA首先高效的進行末端修復。通過采用莖環(huán)形接頭（無單鏈尾巴）進行高效平端連接，降低了背景。封閉的5’端阻止了接頭-接頭二聚體形成。隨后未使用的接頭被降解，進一步降低背景。高保真度擴增的方式完成以上反應，并獲得含有illumina index的文庫。 |
| （*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.） |
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| 圖2. 高cfDNA文庫多樣性、更少的Unmapped Reads。ThruPLEX Plasma-seq Kit構建的文庫，具有高的多樣性和低的duplicates和unmapped reads。圖中表示cfDNA分別提取于3份血漿樣品，文庫定量采用Qubit熒光定量。Bioanalyzer測定mononucleosomal DNA在各樣品的量分別為0.09 ng、0.62 ng、15.44 ng。Pooled libraries采用illumina NextSeq 500 paired end模式測序，且每個文庫產(chǎn)生17 M到25 M reads。每個文庫在down-sampling數(shù)據(jù)至17 M reads以后，計算Duplication rates。 |
| （*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.） |
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| 圖3. 優(yōu)異的靶向測序文庫構建能力。圖中所示ThruPLEX Plasma-seq Kit構建的文庫通過panel進行高效捕獲，對kinome進行深度測序分析以檢測突變。3個血漿樣品分別起始建庫量為5 ng、6.5 ng、10 ng，三次重復。目標區(qū)域采用SureSelectXT2的ClearSeq Human DNA Kinome Panel進行捕獲，并用Illumina Miseq平臺進行測序，平均每個文庫獲得5 M reads，目標堿基被成功捕獲分析。 |
| （*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.） |
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| 圖4. 高重復性的、無偏倚的GC覆蓋度。針對人類基因組，ThruPLEX Plasma-seq Kit表現(xiàn)出高再現(xiàn)性、低偏倚GC覆蓋度NGS文庫構建能力。9次獨立的血漿樣品文庫構建的實驗結果表明，ThruPLEX重復性高于其它產(chǎn)品。文庫的制備是利用的1 mL血漿來源cfDNA，后續(xù)采用illumina NextSeq 500進行測序。作為對比，A公司試劑構建了4份獨立血漿樣品的文庫。 |
| （*圖片來源于Takara Bio USA,Inc.） |
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| 圖5. Karolinska協(xié)會和CRUK測試的結果。5 ng游離cf DNA采用ThruPLEX Plasma seq Kit進行illumina文庫構建。結果表明利用Hiseq平臺進行的Low-pass WGS,每個文庫能獲得接近12.5 M reads。 |
| （*以上數(shù)據(jù)來源于Karolinska 協(xié)會，瑞典） |
| ■ 產(chǎn)品組成 |
| · Template Preparation Buffer（Red） · Template Preparation Enzyme（Red） · Library Synthesis Buffer（Yellow） · Library Synthesis Enzyme（Yellow） · Library Amplification Buffer（Green） · Library Amplification Enzyme（Green） · Nuclease-Free Water（Clear） · Indexing Reagents（Blue） · Quick Protocol（N/A） |
| ■ 保存 |
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